1.培养基与微生物培养
提醒 (1)LB固体培养基添加琼脂等凝固剂,用于单菌落的分离。
(2)全营养LB培养基与尿素固体培养基:①全营养LB培养基(含琼脂糖)是基础培养基;②尿素固体培养基:选择培养基(如以尿素作为唯一氮源的尿素培养基)和鉴别培养基(如尿素培养基中加入酚红)。
(3)加入尿素前的固体培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌,尿素溶液用G6玻璃砂漏斗过滤。
2.灭菌与消毒的比较
类型
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适用范围
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操作方法及注意点
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消毒方法
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煮沸消毒法
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日常生活
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100℃煮沸5~6min
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巴氏消毒法
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不耐高温的液体
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70~75℃煮30min或80℃煮15min
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化学药剂
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水源或生物体结构部分等
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擦拭,如用70%酒精擦拭双手;成熟紫葡萄用高锰酸钾浸泡5min;外植体在70%酒精中浸泡10min,再放入5%次氯酸钠溶液中浸泡5min,然后用另一5%次氯酸钠溶液浸泡5min
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紫外线
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房间、仪器设备
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紫外线照射30min
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热水
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泡菜坛等
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热水清洗坛内壁两次
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灭菌方法
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灼烧
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接种环、接种时用的试管口或瓶口等
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直接在酒精灯火焰的外焰烧红接种环或试管口和瓶口过火
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高压蒸汽
灭菌
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生产和实验室常用器具,如培养基、培养皿等
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高压蒸汽灭菌锅内,条件一般为1kg/cm2,温度121℃,15 min(若为葡萄糖,则灭菌条件为500 g/cm2压力,温度90℃以上,30min);灭菌时间从高压锅内有压力后开始;高压锅或灭菌锅压力和大气压相同时才能打开锅盖
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过滤灭菌
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尿素等加热会分解的物质
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G6玻璃砂漏斗过滤。G6玻璃砂漏斗使用前用纸包好进行高压蒸汽灭菌;G6玻璃砂漏斗使用后用1_mol/L盐酸浸泡,抽滤去酸,再用蒸馏水洗至洗出液呈中性,干燥后保存
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其他
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操作空间:专门的接种室;
操作设备:超净台(用前打开紫外灯和过滤风,用时关闭紫外灯,台面用70%酒精擦拭);
操作环境:酒精灯火焰旁
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